PCR產(chǎn)物的克隆-DNA回收實(shí)驗(yàn)步驟

PCR產(chǎn)物的克隆-DNA回收實(shí)驗(yàn)步驟【實(shí)驗(yàn)原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠中，通上一定電壓進(jìn)行電泳，不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開。切下帶有所需DNA片段的凝膠，用凍融法、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化。2.利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個(gè)非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以把PCR產(chǎn)物插入到質(zhì)粒載體的多克隆位點(diǎn)，可用于PCR產(chǎn)物的克隆和測(cè)序。商品化的T載體有很...

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實(shí)時(shí)熒光pcr檢測(cè)DNA濃度常用的生物試劑

實(shí)時(shí)熒光pcr檢測(cè)利用熒光分析法用特定結(jié)合DNA的染料來(lái)測(cè)定DNA的濃度。常用的DNA染料包括溴化乙錠、Hoechst33258、SYBRGreenI和II、SYBRGold及PicoGreen。溴化乙錠溴化乙錠含有三環(huán)菲嚏平面環(huán)系統(tǒng)，可嵌入到雙鏈DNA堿基之間。嵌入DNA雙螺旋后，溴化乙錠的菲嚏環(huán)平面位于與螺旋軸相垂直的位置，并通過(guò)范德瓦耳斯力與上下堿基結(jié)合。而其平面環(huán)系統(tǒng)被埋在底部，其外側(cè)的苯基和乙烷基處于DNA雙螺旋的大溝內(nèi)。在高強(qiáng)度離子溶液的飽和狀態(tài)，大約每2.5個(gè)堿...

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熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案

熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案無(wú)Ct值或Ct值延遲出現(xiàn):擴(kuò)增曲線信號(hào)不佳，曲線不平滑:標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差。1.擴(kuò)增產(chǎn)物大小不合適：實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度通常在80-150bp之間，如果調(diào)整反應(yīng)的時(shí)間有可能擴(kuò)增500bp的片段。2.PCR反應(yīng)過(guò)程中退火及延伸的時(shí)間過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)：應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增片段的大小予與調(diào)整。3.MgCl,濃度不合適：按0.5mm的間距調(diào)整MgCI2的濃度。4.循環(huán)數(shù)設(shè)置不足：最少設(shè)置35個(gè)循環(huán)，可以增加到45個(gè)循環(huán)。超過(guò)45個(gè)循環(huán)以上背景信號(hào)會(huì)增...

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消毒和滅菌的區(qū)別

微生物行業(yè)及微生物實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常會(huì)用到消毒、滅菌和清潔那么清潔、消毒和滅菌的區(qū)別是什么呢？滅菌滅菌的定義是破壞或消除所有形式的微生物生命的過(guò)程，并通過(guò)物理或化學(xué)方法在設(shè)施中進(jìn)行。加壓蒸汽、干熱、EtO氣體、過(guò)氧化氫氣體等離子體和液體化學(xué)品是醫(yī)學(xué)環(huán)境設(shè)施中使用的主要消毒劑。其實(shí)滅菌和消毒是有區(qū)別的，一些衛(wèi)生專業(yè)人員以及技術(shù)和商業(yè)文獻(xiàn)將“消毒”稱為“滅菌”，將物品稱為“部分無(wú)菌”。當(dāng)化學(xué)品被用來(lái)破壞所有形式的微生物生命時(shí)，它們可以被稱為化學(xué)消毒劑。這些用于較短暴露時(shí)間的相同殺菌劑也可...

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季銨鹽類消毒劑是什么

季銨鹽類消毒劑是什么？季銨化合物廣泛用作消毒劑。季銨鹽是較好的清潔劑，但高硬度的水和棉和紗布?jí)|等材料會(huì)使它們的殺菌性降低，因?yàn)椴蝗苄猿恋砦锘蛎薏己图啿級(jí)|分別吸收了活性成分。季銨化合物與其他幾種消毒劑（例如酚類物質(zhì)、碘伏）一樣，革蘭氏陰性菌可以在其中存活或生長(zhǎng)。季銨化合物消毒劑的化學(xué)性質(zhì)在化學(xué)上，季銨鹽是有機(jī)取代的銨化合物，其中氮原子的化合價(jià)為5，其中四個(gè)取代基(R1-R4)是給定大小或鏈長(zhǎng)的烷基或雜環(huán)基，第五個(gè)(X-)是鹵化物、硫酸鹽或類似的自由基.每種化合物都表現(xiàn)出自己的抗...

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