細胞培養(yǎng)干貨-干細胞培養(yǎng)基和培養(yǎng)基添加劑

30多年來，生物產(chǎn)業(yè)一直在為許多細胞類型開發(fā)專門的細胞培養(yǎng)基，包括原代細胞和干細胞。細胞培養(yǎng)是生命科學(xué)中常見和復(fù)雜的技術(shù)之一，培養(yǎng)基本身是維持培養(yǎng)中健康、增殖的干細胞的關(guān)鍵因素。所有干細胞培養(yǎng)基的基本成分主要包含：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、緩沖系統(tǒng)、谷氨酰胺、血清（或血清替代品）、特定生長因子以及其他補充劑等。一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基經(jīng)典基礎(chǔ)培養(yǎng)基（DMEM、MEM、RPMI等）是化學(xué)成分明確的配方，每種配方都是為支持特定的細胞系或培養(yǎng)條件而開發(fā)的。許多基礎(chǔ)培養(yǎng)基起初是使用小鼠成纖維細胞、HeLa或...

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hTERT 永生化腎上皮細胞培養(yǎng)方法

血管平滑肌脂肪瘤是腎臟的良性腫瘤，起源于假定的血管周圍上皮樣細胞。這些細胞可能會分化成具有黑素細胞、平滑肌或脂肪細胞特征的細胞。然而，血管平滑肌脂肪瘤的研究因缺乏成熟的血管平滑肌脂肪瘤衍生細胞系和良好的動物模型而受到限制。hTERT永生化腎上皮細胞來源于血管平滑肌脂肪瘤，因此研究人員現(xiàn)在可以在體外利用這些細胞的原代細胞特性和延長的壽命。UMB1949細胞系表達NG2和L1，并且在塊蛋白(Tsc2)的外顯子33中有一個確定的5bp缺失，在塊蛋白（和/或錯構(gòu)蛋白）中有突變。因此，...

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為什么要進行進行細胞系STR鑒定

據(jù)統(tǒng)計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識，只因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導(dǎo)致研究結(jié)論錯誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細胞治療災(zāi)難性后果……，這將浪費大量時間、精力和金錢。世人皆知，細胞身嬌體貴難養(yǎng)活，養(yǎng)好細胞實屬不易。而這其中煩的是污染、怕的是掉包。因為盡管研究僧們有方法把一切污染的源頭扼殺在搖籃之內(nèi)，卻沒有火眼金睛辨別已經(jīng)換了馬甲的錯誤細胞。因而細胞一旦被李代桃僵，再資深的科研者都會陰溝里翻船，所以細胞鑒定顯得尤為重要。為什么要進行細胞系鑒定？進行細胞系STR鑒定是很重要的。...

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使用ipsc誘導(dǎo)多能干細胞生成類器官技術(shù)簡介

類器官是復(fù)雜的3-D器官樣微組織，由多種分化的細胞類型組成，其結(jié)構(gòu)組織類似于體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的細胞，具有中央腔和其他類似體內(nèi)的結(jié)構(gòu)特征。從ipsc誘導(dǎo)多能干細胞產(chǎn)生的類器官已被描述用于胃、腸、肺、大腦、腎、肝臟等各種組織，這些類器官是其他體外模型的有吸引力的替代品；這些微組織比2-D細胞培養(yǎng)或簡單的3-D球體聚集體更好地概括了體內(nèi)組織表型，但沒有與器官外植體或組織切片相關(guān)的挑戰(zhàn)，例如培養(yǎng)壽命有限。事實上，類器官保留了許多細胞培養(yǎng)的典型有利特征，例如維持穩(wěn)定培養(yǎng)數(shù)月的能力，以及冷凍保存...

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單層細胞系傳代培養(yǎng)指南

大多數(shù)細胞系和原代細胞培養(yǎng)物生長為單一厚度的細胞層（單層）或附著在玻璃或經(jīng)過特殊處理的塑料基質(zhì)上的薄片。為了保持培養(yǎng)物的健康和積極生長，通常需要定期對它們進行傳代培養(yǎng)。常見的傳代培養(yǎng)方法涉及通過使用蛋白水解酶（如胰蛋白酶或膠原酶）破壞細胞間和細胞與基質(zhì)的連接。在細胞解離成主要由單細胞組成的懸浮液后，將它們稀釋并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)容器中。在那里它們可以重新附著并開始生長和分裂，經(jīng)過一段時間的孵化后再次接近匯合。此時，它們可以再次進行傳代培養(yǎng)或用于實驗。以下指南描述了典型單層細胞培養(yǎng)...

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