基因定點(diǎn)突變技術(shù)

體外定點(diǎn)突變技術(shù)是當(dāng)前生物學(xué)各領(lǐng)域研究中的一種重要實(shí)驗(yàn)手段，是改造、優(yōu)化基因的便捷方案，是探索啟動子調(diào)節(jié)位點(diǎn)的有效手段，也是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的復(fù)雜關(guān)系的有力工具。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定其功能，二者之間的關(guān)系是蛋白質(zhì)組研究的重點(diǎn)之一。對某個已知基因的特定堿基進(jìn)行定點(diǎn)改變、缺失或者插入，可以改變對應(yīng)的氨基酸序列和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，對突變基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行研究有助于人類了解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系，探討蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)/結(jié)構(gòu)域。CRISPR-Cas9系統(tǒng)的靶向雙鏈斷裂（DSB），基因組通常通...

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藥廠的清潔和消毒措施

對于制藥企業(yè)而言，當(dāng)某一產(chǎn)品生產(chǎn)完畢后，總會有一些微生物和少許原輔料殘留于設(shè)備中，在溫度和濕度達(dá)到一定程度時，微生物能夠與原輔料中殘留有機(jī)物出現(xiàn)無法物化反應(yīng)，通過大量繁殖能夠形成不同類型代謝物，這些代謝物會從一定程度上影響藥物藥效甚至?xí)a(chǎn)生毒副作用，從而使制藥企業(yè)每當(dāng)生產(chǎn)一段時間或者更換產(chǎn)品后會存在產(chǎn)品質(zhì)量問題，因此無論維修設(shè)備或設(shè)備空閑一段時間，需要實(shí)現(xiàn)設(shè)備清潔工作。對于制藥企業(yè)來說，清潔主要針對設(shè)備中殘留的微生物或者各種代謝物，其總量在不影響藥品規(guī)定的質(zhì)量、藥效及安全性。...

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CRISPR/Cas9 基因編輯和NGS驗(yàn)證

CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)需要通過下一代測序(NGS)來驗(yàn)證，能夠在核苷酸水平分辨率下進(jìn)行大規(guī)模評估基因編輯的準(zhǔn)確性和可靠性。高效、可自動化和可擴(kuò)展的CIRCLE-seq是一種體外NGS測定，可以對CRISPR介導(dǎo)的切割進(jìn)行靈敏的脫靶檢測。CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)CRISPR代表成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列。這些重復(fù)的DNA片段最初來源于病毒病原體，并作為模板將CRISPR相關(guān)蛋白9(Cas9)核酸內(nèi)切酶引導(dǎo)至新入侵的病毒。當(dāng)Cas9遇到同源病毒序列時，它會...

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HE染色實(shí)驗(yàn)中常見問題及應(yīng)對措施

HE染色實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案HE染色是石蠟切片技術(shù)中常用的染色方法之一，簡稱為蘇木精-伊紅染色法。該方法使用堿性的蘇木精染液將細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)和胞質(zhì)內(nèi)的核酸染成紫藍(lán)色，同時使用酸性染料伊紅將細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分染成紅色。1、切片出現(xiàn)白色斑點(diǎn)原因：(1)烘片溫度過低，導(dǎo)致玻片未干透；(2)切片在二甲苯中停留時間過短；(3)二甲苯使用時間過長，導(dǎo)致脫蠟不效果不好。對策：若玻片未干透，先用無水乙醇去除水分，再重新脫蠟。若斑點(diǎn)是由于停留時間過短或使用時間過長造成的，則需重新操...

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穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選步驟

穩(wěn)定細(xì)胞株是一種常用于基因表達(dá)、藥物篩選和蛋白質(zhì)表達(dá)等領(lǐng)域的工具。但是，穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選需要經(jīng)過一系列的步驟和實(shí)驗(yàn)，下面介紹一下穩(wěn)定細(xì)胞株篩選的兩種方法和穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選簡要步驟：一、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標(biāo)志來篩選該細(xì)胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株。1、篩選濃度測定，以10~14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；2、進(jìn)行細(xì)胞接種，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60...

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